一、范圍
高效液相色譜儀對(duì)動(dòng)物性食品中氟喹諾酮類藥物殘留檢測(cè)方法適用于豬的肌肉、脂肪、肝臟和腎臟，雞的肌肉、肝臟和腎臟組織中達(dá)氟沙星、恩諾沙星、環(huán)丙沙星和沙拉沙星藥物殘留量檢測(cè)。
二、高效液相色譜儀對(duì)動(dòng)物性食品中氟喹諾酮類藥物殘留檢測(cè)方法
1、方法提要或原理
用磷酸鹽緩沖溶液提取試料中的藥物，C18柱凈化，流動(dòng)相洗脫。以磷酸—乙腈為流動(dòng)相。用高效液相色譜—熒光檢測(cè)法測(cè)定，外標(biāo)法定量。
2、試劑和材料
5mol/L氫氧化鈉溶液：取氫氧化鈉飽和液14mL，加水稀釋至50mL。
0.03mol/L氫氧化鈉溶液：取5mol/L氫氧化鈉溶液0.6 mL，加水稀釋至100 mL。
0.05mol/L磷酸—三乙胺溶液：取濃磷酸3.4 mL，用水稀釋至1000 mL。用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至2.4（以配4L溶液為例，取濃磷酸3.4 mL×4=13.6 mL，加水使成4000 mL，用三乙胺調(diào)pH值至2.4）。
磷酸鹽緩沖溶液（用于肌肉、脂肪組織）：取磷酸二氫鉀6.8g,加水使溶解并稀釋至500 mL，用5mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7.0。
磷酸鹽溶液（用于肝臟、腎臟組織）：取磷酸二氫鉀6.8g,加水使溶解并稀釋至500 mL，pH值為4.0~5.0。
標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：分別取達(dá)氟沙星對(duì)照品約10mg,恩諾沙星、環(huán)丙沙星和沙拉沙星對(duì)照品各約50mg,精密稱定，用0.03mol/L氫氧化鈉溶液溶解并稀釋成濃度為0.2mg/mL(達(dá)氟沙星)和1 mg/mL（恩諾沙星、環(huán)丙沙星和沙拉沙星）的標(biāo)準(zhǔn)工作液。置2℃~8℃冰箱中保存，有效期為1周。
3、對(duì)照品溶液稀釋步驟
對(duì)照品儲(chǔ)備液濃度：1 mg/mL
殘留限量（100μg/kg→100ng/g）
上機(jī)濃度為0.05μg/kg：
1 mg/mL×1mL
50→20μg/mL
20μg/mL ×0.5mL
200→0.05μg/kg（此濃度對(duì)應(yīng)殘留限量濃度，因?yàn)?0mL提取液只有5mL上柱）
陽(yáng)性添加（100μg/kg→100ng/g 樣品/2g→200ng/2g）
20μg/mL×0.5mL
10mL →1μg/mL
1μg/mL×0.2mL →200ng
注：甲磺酸達(dá)氟沙星（C19H20FN3O3?CH4O3S）： C19H20FN3O3 = 357.39 =78.81%
C19H20FN3O3?CH4O3S 453.49
鹽酸環(huán)丙沙星（C17H18FN3O3?Hcl）： C17H18FN3O3 = 331.35 = 90.09%
C17H18FN3O3?Hcl 367.81
三、高效液相色譜儀對(duì)動(dòng)物性食品中氟喹諾酮類藥物殘留測(cè)定步驟
1、試料的制備
絞碎后的供試樣品、空白樣品、空白添加試料樣品
2、提取
?。?±0.05g）試料，置50mL離心管中，加磷酸鹽緩沖溶液10.0mL，10000r/min勻漿1min。勻漿液轉(zhuǎn)入離心管中，中速振蕩5min，離心（肌肉、脂肪10000r/min5min；肝、腎15000r/min10min），取上清液，待用。用磷酸鹽緩沖溶液10.0mL洗刀頭及勻漿杯，轉(zhuǎn)入離心管，洗殘?jiān)靹?，中速振?min,離心（肌肉、脂肪10000r/min5min；肝、腎15000r/min10min）。合并兩次上清液，混勻，備用。
3、凈化
固相萃取柱先依次用甲醇、磷酸鹽緩沖溶液各2mL預(yù)洗。取上清液5.0mL過柱，用水1mL淋洗，擠干。用流動(dòng)相1.0mL洗脫，擠干，收集洗脫液。經(jīng)濾膜過濾后作為試樣溶液，供高效液相色譜法測(cè)定。
4、色譜條件
流動(dòng)相：0.05mol/L磷酸/三乙胺溶液—乙腈（82+18，v/v），使用前經(jīng)微孔濾膜過濾;
流速：0.8mL/min；
檢測(cè)波長(zhǎng)：激發(fā)波長(zhǎng)280nm；發(fā)射波長(zhǎng)450nm；
進(jìn)樣量:20μL
四、測(cè)定方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度
1、靈敏度
達(dá)氟沙星、恩諾沙星、環(huán)丙沙星和沙拉沙星在雞和豬的肌肉、脂肪、肝臟及腎臟組織中的檢測(cè)限為20μg/kg，殘留限量為100μg/kg。
2、準(zhǔn)確度
本方法在20μg/kg~500μg/kg添加濃度的回收率為60%~100%。
3、精密度
本方法的批內(nèi)變異系數(shù)≤15%，批間變異系數(shù)≤20%。
五、結(jié)論
綜上所述，本文用到的高效液相色譜儀對(duì)動(dòng)物性食品中氟喹諾酮類藥物殘留檢測(cè)方法是高效、快速、便捷的測(cè)試方法，具有一定的使用價(jià)值。
