一、概述
嬰幼兒乳粉是根據(jù)不同生長(zhǎng)時(shí)期嬰幼兒的營(yíng)養(yǎng)需要進(jìn)行設(shè)計(jì)的，以奶粉、乳清粉、大豆、飴糖等為主要原料，加入適量的維生素和礦物質(zhì)以及其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，經(jīng)加工后制成的粉狀食品。其營(yíng)養(yǎng)均衡全面，營(yíng)養(yǎng)成分接近母乳，是母乳的替代品。必需脂肪酸膳食補(bǔ)充已成為嬰幼兒營(yíng)養(yǎng)的世界性標(biāo)準(zhǔn)，添加了必需脂肪酸的新一代嬰幼兒配方奶粉與傳統(tǒng)嬰幼兒配方奶粉相比，在促進(jìn)嬰幼兒正常發(fā)育方面具有無可比擬的優(yōu)勢(shì)，能得到消費(fèi)者更多的喜愛。其中添加的脂肪酸是作為營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑添加的，但由于營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑大多都有安全閾值，因而在嬰幼兒配方食品中對(duì)脂肪酸含量有嚴(yán)格的要求，嬰幼兒配方食品中脂肪酸檢驗(yàn)要求較高，對(duì)其實(shí)現(xiàn)快速、準(zhǔn)確的檢驗(yàn)有著特殊的意義。本實(shí)驗(yàn)將嬰幼兒奶粉樣品經(jīng)酸水解后利用提取劑提取出脂肪經(jīng)甲基化反應(yīng)后，用氣相色譜儀測(cè)定嬰幼兒乳粉脂肪酸組成，樣品處理方法簡(jiǎn)單快捷，易于操作，方法重現(xiàn)性良好。
二、氣相色譜儀測(cè)定嬰幼兒乳粉脂肪酸組成實(shí)驗(yàn)材料與儀器準(zhǔn)備
1、試劑
異辛烷、甲醇、正庚烷皆為色譜純；實(shí)驗(yàn)用水為密理博超純水儀制的超純水；其余所用試劑均為分析純；脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品(37種)、十三烷酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品。
2、儀器準(zhǔn)備
氣相色譜儀6891N（南京科捷分析儀器有限公司）、冷凍高速離心機(jī)（美國(guó)ThermoFisher公司）；渦旋混合儀；超聲波清洗儀(南京科捷分析儀器有限公司)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。
三、氣相色譜儀測(cè)定嬰幼兒乳粉脂肪酸組成實(shí)驗(yàn)方法步驟
1、樣前處理
準(zhǔn)確稱取嬰兒配方奶粉樣品10.0000g置于250mL具塞三角瓶中，加25mL水加熱溶解，混勻后再加20mLHCl溶液(濃鹽酸先用等體積的水進(jìn)行稀釋)搖勻。將搖勻后樣液放置在附帶加熱功能的超聲波清洗儀中，90℃超聲提取30min。取出后加入20mL乙醚，冷卻后加入20mL乙醇加塞超聲提取5min，后再加入25mL石油醚，超聲提取5min，振搖后離心靜置，將有機(jī)層轉(zhuǎn)入燒瓶中。再分別萃取2次，后兩次每次加入的試劑為15mL乙醚、10mL乙醇、15mL石油醚，操作方法同第1次萃取。把提取的所有有機(jī)層合并，減壓濃縮至近干，用異辛烷溶解殘留物并定容至5mL，搖勻，加1mL十三烷酸甲酯內(nèi)標(biāo)溶液，吸取2mL氫氧化鉀甲醇溶液，超聲振搖25min，進(jìn)行甲基化反應(yīng)。如果有機(jī)層有渾濁，可離心至澄清，此有機(jī)層為樣品待測(cè)液。
2、溶液配制
脂肪酸甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取適量脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品(精確到0.0001g)，用異辛烷配制成1mg/mL脂肪酸甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)液，在－18℃條件下保存。十三烷酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取適量十三烷酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品(精確到0.0001g)，用異辛烷配制成1mg/mL溶液。氫氧化鉀甲醇溶液：稱取一定量的氫氧化鉀，用無水甲醇配制成5mol/L氫氧化鉀甲醇溶液。標(biāo)準(zhǔn)品混合溶液：取脂肪酸甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)品配成0、
10、20、40、80、100μg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液，內(nèi)加1mL內(nèi)標(biāo)十三烷酸甲酯。
3、氣相色譜儀實(shí)驗(yàn)條件
進(jìn)樣口溫度：250℃；
載氣流速：1.0mL/min；
進(jìn)樣量：1μL。
分流比：30:1；
色譜柱：CD-2560
毛細(xì)管色譜柱(100m×0.25mm，0.2μm)；
檢測(cè)器溫度：260℃；
柱溫：140℃保持5min后以4℃/min速率升溫至240℃；
四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析
取20μg/mL的7種脂肪酸混合標(biāo)樣，進(jìn)樣量為1μL，測(cè)得信噪比，檢測(cè)限以10倍噪聲計(jì)算，以5.0g稱樣量，最后定容體積為10mL，進(jìn)樣量1μL計(jì)，得出常見的幾種脂肪酸即γ-亞麻酸、花生四烯酸、α-亞麻酸、EPA、亞油酸、共軛亞油酸、DHA檢出限皆為0.1mg/100g，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于GB 5413.27—2010《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)：嬰幼兒食品和乳品中脂肪酸的測(cè)定》中規(guī)定的0.5mg/100g要求。
采用的樣品處理方法以及儀器檢測(cè)方法線性好。加標(biāo)回收率在86.4%～103.9%和精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明樣品檢測(cè)相對(duì)偏差在0.91%～3.82%，而且與GB5413.27—2010《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)：嬰幼兒食品和乳品中脂肪酸的測(cè)定》標(biāo)準(zhǔn)中的方法相比：既能夠獲得標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的檢測(cè)限，又使得操作過程變得簡(jiǎn)易可行，且樣品中待測(cè)組分的分離度很好，能夠同時(shí)測(cè)定嬰幼兒乳粉中的脂肪酸成分，此方法更適合在基層實(shí)驗(yàn)室推廣。
